王丹丹¹ , 林辰壹^1* , 马晓蓓² , 刘玉³

1 新疆农业大学林学与园艺学院, 乌鲁木齐, 830052; 2 昌吉市农机推广站, 昌吉, 831100; 3 乌鲁木齐市米东区农业技术推广中心, 乌鲁木齐,831400
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 22 篇   
收稿日期: 2018年03月28日    接受日期: 2018年04月30日    发表日期: 2019年01月18日

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为了确保反应体系的可行性，以便更好地开展大蒜野生近缘种的 SRAP标记的遗传多样性分析，本研究以新疆大蒜野生近缘种为材料，采用 L16(44)正交法，对其反应体系进行 4因素 4水平优化试验。结果表明：对大蒜野生近缘种 PCR扩增影响最大的是 dNTPs浓度， 影响最小的是 Taq 酶浓度。筛选出 15对引物，经过程序和温度筛选，最终确定 SRAP的反应程序为： 94℃条件下预变性 1 min，其次在 94℃变性 1 min、35℃退火 1min、 72℃延伸 1 min的环境下进行 5 个循环的反应，再与前 5个循环相同环境下，提高其退火温度至52℃进行35个循环，最后72℃延伸 10 min。2 滋L 10伊PCR Buffer， dNTPs浓度 0.225 mmol/L，引物浓度 0.250 滋mol/L， Taq 酶用量 1.000 U，模板 DNA 用量 75.000 ng， ddH2O 补足 20 滋L，为最佳 SRAP-PCR 反应体系。研究结果为进一步开展大蒜野生近缘种的遗传多样性分析、亲缘关系鉴定和分子标记辅助育种提供技术支持。

大蒜野生近缘种； SRAP；正交试验；反应体系