姜贵媛 , 张欣欣^*

东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心, 哈尔滨, 150040
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 15 篇   
收稿日期: 2018年03月26日    接受日期: 2018年04月15日    发表日期: 2019年01月22日

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为了进一步探究水稻(Oryza sativa) Ca²⁺依赖性核酸酶基因 OsCaN 的功能，本研究通过 PCR 克隆出OsCaN，并将其插入到带有 GST 标签的原核表达载体 pGEX-6p-3 中。成功构建了 pGEX-6p-3-OsCaN1、pGEX-6p-3-OsCaN3、pGEX-6p-3-OsCaN4 原核表达载体，再将其转化到大肠杆菌 BL21 中，通过 IPTG 诱导表达融合蛋白。利用蛋白亲和层析柱对重组蛋白进行纯化并通过 SDS-PAGE 进行电泳检测，随后对核酸酶的酶活性进行鉴定。可以得到 GST-OsCaN 融合蛋白并检测出目的蛋白相对分子量约为 64 kD、65.5 kD 和82.5 kD，同时确定了水稻 OsCaN1、OsCaN3 以及 OsCaN4 基因是钙离子依赖性核酸酶。本研究为后续分析水稻 Ca²⁺依赖性核酸酶 OsCaN 基因的生物学功能提供理论参考。

水稻；Ca2+依赖性核酸酶；载体构建；蛋白纯化；酶活性