徐萍萍¹ , 房宸曦 ¹ , 梁丽娜 ¹ , 王亚鹏¹ , 张宁^1* , 司怀军^1,2

1 甘肃农业大学生命科学技术学院, 兰州, 730070; 2 甘肃省干旱生境作物学省部共建国家重点实验室培育基地, 甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室, 兰州, 730070
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 15 篇   
收稿日期: 2018年02月23日    接受日期: 2018年03月19日    发表日期: 2019年01月16日

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为了筛选与马铃薯 StERF5 转录因子相互作用的宿主蛋白，构建其诱饵载体，本研究利用 PCR 方法扩增得到马铃薯 StERF5 基因的编码序列，克隆至载体 pMD18-T，验证正确后插入到酵母双杂交系统诱饵表达载体 pGBKT7，经双酶切、PCR 反应及测序验证其正确后，利用 PEG/LiAc 法将构建好的重组诱饵载体 pGBKT7-StERF5 及空载体 pGBKT7 分别转化到酵母 Y2HGlod 感受态细胞中，检测其对酵母菌株是否有毒性作用和自激活活性。结果表明：扩增得到 StERF5 基因，成功构建了诱饵表达载体 pGBKT7-StERF5，此诱饵载体对酵母宿主细胞无毒性且不具自主激活报告基因的功能。研究结果可为进一步利用酵母双杂交技术筛选与 ERF5 基因互作的宿主蛋白及功能研究提供科学依据。

马铃薯；ERF5 基因；诱饵载体；酵母双杂交