邹情 , 赵懿琛^* , 赵德刚^*

贵州大学药学院农业生物工程研究院,贵州省农业生物工程重点实验室, 山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室, 贵州省山地生态与农业生物工程2011 协同创新中心,贵阳, 550025
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《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17卷, 第 12 篇   
收稿日期: 2018年03月12日    接受日期: 2018年04月15日    发表日期: 2019年01月29日

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植物 Dirigent蛋白认为指导木脂素和木质素的生物合成，同时在生物防御应答，次生代谢调控和病原体抗性的过程中起到了重要的作用。本研究以实验室前期克隆得到杜仲 Dirigent1 基因(EuDIR1)为基础，利用基因重组技术构建pET-30a-EuDIR1 原核表达载体。重组载体转化大肠杆菌 BL21 (DE3)中，在 15℃下0.1 mmol/L异丙基硫代 茁-D- 半乳糖苷诱导 6 h后，蛋白的沉积量达到最高值，表达模式主要为包涵体。对包涵体进行溶解，使用镍－亚氨基二乙酸亲和层析柱进行纯化。收集纯度较高的洗脱组分进行透析复性，并用 15%十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western Blot 鉴定重组蛋白。结果表明，成功构建了pET-30a-EuDIR1 原核表达载体，表达菌株诱导后在相对分子质量约 18 kD处有 1条特异性蛋白条带，包涵体纯化、复性后，经 Western Blot鉴定，获得可溶性且纯度较高的重组蛋白。实验中得到的 EuDIR1蛋白为体外生化实验提供了科学依据。

EuDIR1；杜仲；原核表达；蛋白纯化