王颖^1,2 , 卢丽丽^1,2 , 周福仙^1,2 , 李先平^1,2 , 隋启君^1,2* , 潘哲超^1,2*

1 云南省农业科学院经济作物研究所, 云南省马铃薯工程技术研究中心, 昆明, 650205; 2 农业部云贵高原马铃薯与油菜科学观测实验站, 昆明,650200
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 25 篇   
收稿日期: 2018年02月07日    接受日期: 2018年02月15日    发表日期: 2019年01月23日

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本研究以马铃薯品种自来洋芋为实验材料，利用正交试验的方法对影响马铃薯 NBS profiling 体系稳定性的 7 个主要因素：PCR Buffer 体积、dNTP 浓度、Taq 酶活力、DNA 模板浓度、引物浓度、引物接头浓度及稀释倍数，进行 4 水平设计，选用 L₃₂(4⁷)正交表，以 PCR 产物的多态性为评价标准进行优化试验，从而建立多态性最高的反应体系。结果表明，马铃薯 NBS profiling 体系的优化反应体系最终确定为：在 25 μL 体系中，10×PCR Buffer 体积为 2.5 μL、dNTP 浓度为 250 μmol/L、Taq 酶活力为 0.02 U、DNA 模板浓度为 400 ng、引物浓度为 30 μmol/L、引物接头浓度为 20 μmol/L，并将第 1 次 PCR 产物稀释 10 倍，该优化体系可有效提高 NBS-Profiling 的多态性。NBS-Profiling 技术在马铃薯种质资源的抗病基因挖掘方面具有重要的应用价值，因此优化 NBS-Profiling 反应体系，确定多态性最高的反应体系对该方法的应用具有重要作用。
 

马铃薯；NBS profiling；正交设计