钱前^1,2 , 王钧^1,2 , 王莉¹ , 李毅¹ , 胡延萍^1*

1 中国科学院西北高原生物研究所, 青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室, 西宁, 810008; 2 中国科学院大学, 北京, 100049
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 26 篇   
收稿日期: 2018年02月05日    接受日期: 2018年03月02日    发表日期: 2019年01月17日

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黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)为茄科枸杞属小灌木。果实为黑紫色球形浆果，具有较高的药用价值、营养价值、生态价值和经济价值。该研究以青海省野生黑果枸杞为材料，将对黑果枸杞 ISSR-PCR 反应产生主要影响的五种因子(Taq DNA 聚合酶, dNTP, Mg²⁺，引物和模板 DNA)进行 L₁₆(4⁵)的正交试验，以建立黑果枸杞 ISSR-PCR 最佳反应体系，并对反应体系进行验证。在此基础上筛选出适宜的 ISSR 引物，用梯度法优化各引物的最佳退火温度。结果表明：黑果枸杞 20 μL ISSR-PCR 反应体系中包括 Taq DNA 聚合酶 0.02 U/20 μL，Mg²⁺ 1.65 mmol/L，dNTP 0.15 mmol/L，引物 0.60 μmol/L 和模板 DNA 50 ng；在 100 条 ISSR 引物中筛选出 16 条最适引物，并确定了各引物的最适退火温度为 44℃~54.5℃；最佳扩增程序设定为 94℃预变性 5 min；然后 94℃变性 20 s，44℃~54.5℃复性 1 min，72℃延伸 1 min 20 s，共进行 38 个循环；最后 72℃延伸 6 min，4℃保存。该体系在黑果枸杞不同样品中所得条带清晰且多态性丰富，有助于后续青海省黑果枸杞种质资源筛选和遗传多样性分析研究。

黑果枸杞；枸杞属；ISSR-PCR；正交试验设计；反应体系