谢一青¹ , 黄勇² , 卓仁英¹ , 李志真² , 姚小华¹

1 中国林业科学研究院亚热带林业研究所, 富阳, 311400;
2 福建省林业科学研究院, 福州, 350012
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2013 年, 第 11卷, 第 20 篇   doi: 10.3969/mpb.011.000611
收稿日期: 2012年11月13日    接受日期: 2013年02月04日    发表日期: 2013年08月05日

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以小果油茶和普通油茶的嫩叶及种仁为材料，对影响其cDNA-AFLP反应体系的关键因子进行优化分析，筛选出适合油茶的cDNA-AFLP反应体系。结果表明：分别用EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒和Trizol法能成功获得高质量的油茶嫩叶和种仁总RNA；从总RNA中分离的mRNA经合成双链cDNA后，用限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ在37℃下5 h内酶切完全，经5 U T₄连接酶16℃连接的产物稀释10倍后可直接用于预扩增；在20 μL选择性扩增体系中，以预扩增产物稀释30倍为模版、dNTP (10 mmol/L) 1.5 μL、引物(10 μmol/L) 1.0 μL、Taq酶用量1.25 U时的扩增效果较好。利用优化体系成功筛选出61对可以获得带型丰富且重复性好的引物组合。差异片段回收及PCR检测的结果表明，优化后的cDNA-AFLP分析体系适用于油茶相关差异基因的表达研究。

油茶；cDNA-AFLP；体系优化；引物筛选