孙雨晴^1,2 , 陈立^2,3 , 杨亚会^2,3 , 杨妍妍² , 吴雄² , 于占东^1* , 霍雨猛^2*

1吉林农业大学园艺学院, 长春, 130118; 2 山东省农业科学院蔬菜花卉研究所, 山东省设施蔬菜生物学重点实验室, 国家蔬菜改良中心山东分中心,济南, 250100; 3 山东农业大学园艺科学与工程学院, 泰安, 271018
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 35 篇   
收稿日期: 2018年01月26日    接受日期: 2018年02月28日    发表日期: 2019年01月17日

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为了探究不同提取方法对葱属蔬菜作物叶绿体 DNA提取效果的影响，首先以大葱叶片为实验材料，采用高盐低pH值法和蔗糖 DNase法，对其进行叶绿体 DNA提取测试。结果表明， 高盐低 pH法优于蔗糖DNase法，其 DNA纯度相似， A260/A280 值分别 1.984和 1.977；产率差异大，分别为 0.482 滋g/g FW(fresh weight, FW)和0.059 滋g/g FW，高盐低pH值法是蔗糖DNase法产率的8.17倍。随后，利用叶绿体MatK、线粒体Atp6 和核LFY 基因设计引物，根据各组引物自身的扩增效率，以试剂盒提取的总 DNA为对照，分别对三种细胞器DNA拷贝数的比值进行评估研究，高盐低 pH法提取叶绿体 DNA含量是试剂盒法的 78.38倍，而蔗糖 DNase 法为 15.51倍， 高盐低 pH法是蔗糖 DNase法的 5.05倍。高盐低 pH法提取的叶绿体 DNA产率和含量均优于蔗糖 DNase法，同时在此基础建立了细胞器 DNA含量定量分析方法。随后我们用高盐低 pH法对葱属蔬菜作物的洋葱、大蒜和韭菜进行了测试，获得了预期的效果。该研究为今后葱属作物高效、高纯度、无污染的叶绿体 DNA提取和葱属蔬菜作物细胞器全基因组测序提供依据。

葱属蔬菜作物；叶绿体 DNA；高盐低pH值法；蔗糖DNase法