史梦玉 , 林春花 , 刘文波 , 缪卫国^* , 郑服丛^*

海南大学热带农林学院, 海口, 570228
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 30 篇   
收稿日期: 2018年01月20日    接受日期: 2019年02月06日    发表日期: 2019年01月24日

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为了探索建立一种快速、简便适用于田间 LAMP (loop-mediated isothermal amplification)检测的橡胶树白粉菌 DNA 粗提取方法，在无液氮也不需要研磨的情况下，利用渗透压破壁的方法提取橡胶树白粉菌DNA。通过改变渗透压对橡胶树白粉菌 DNA 进行提取，使用特异性引物 OH-666A (5'-ACTGACACCCCATCACGACTAAAA-3')，OH-666S (5'-ATATTCTCACGAAGGAAAGCATTG-3')进行 PCR 扩增，并与试剂盒提取 DNA 的 PCR 产物进行比较，对提取的 DNA 进行 LAMP 检测。20 μL 甘油加入 600 μL ddH₂O，离心10 min，去上清，加 50 μL 水离心 2 min 即可提出橡胶树白粉菌的 DNA，PCR 扩增能获得清晰目的条带，对得到的扩增产物进行测序，同时对提取的 DNA 进行 LAMP 检测，并与实验室常规方法比对，所有结果均一致。破壁法可用于橡胶树白粉菌 DNA 的快速提取，由于不需要特殊仪器，且快速方便，在田间容易实现，所以更适用于田间橡胶树白粉菌 DNA 的田间粗提取，对开展橡胶树白粉病田间分子预测提供了技术支持。
 

橡胶树白粉菌；甘油破壁法；DNA； LAMP 检测