刘阳颖^1* , 高乐^2* , 韩俊¹ , 李润枝¹ , 康恩宽¹ , 韩天富² , 谢皓¹ , 王程^1**

1北京农学院植物科学技术学院, 北京农业应用新技术北京市重点实验室,北京, 102206; 2 中国农业科学院作物科学研究所, 农业部北京大豆生物学重点实验室,北京, 100081
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 14 篇   
收稿日期: 2018年01月02日    接受日期: 2018年02月05日    发表日期: 2018年12月19日

持绿基因(Stay Green gene)在植物衰老过程中起到了重要的作用。本研究利用同源序列 PCR方法、Gateway重组技术和子叶节遗传转化方法，对大豆持绿基因 GmSGR 进行 RNAi 载体的构建，并将其转入到大豆受体中，获得转基因阳性植株。结果显示，分别获得长度为 786 bp的 GmSGR1 CDS序列,长度为 816 bp
的GmSGR2 CDS序列及355 bp的 attB-GmSGRi干扰片段。依据 RNAi引物设计原则和Gateway重组技术，将干扰片段依次导入到入门载体 pDONR221 和表达载体 pB7GWIW2 (域)中，并转化农杆菌 EHA105，通过子叶节法将其转入大豆受体中，最终获得阳性转基因植株。本研究在 mRNA水平沉默同源靶基因，干扰大豆GmSGR 基因功能，结果显示其叶片和种子有趋向持绿的特性。本研究为探究持绿基因的遗传效应，作用机理提供实践参考，为高光效大豆的遗传改良，探讨植物衰老延缓机制，提高产量和品质等提供理论支持。

大豆；持绿基因；基因克隆；RNA干扰载体；遗传转化