梁雪¹ , 张佳薇¹ , 赵兴堂¹ , 何利明¹ , 康雪¹ , 詹亚光^1,2*

1 东北林业大学生命科学学院, 哈尔滨, 150040; 2 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室, 哈尔滨, 150040
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 28 篇   
收稿日期: 2017年11月15日    接受日期: 2017年11月30日    发表日期: 2018年12月20日

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以成熟水曲柳胚的三个不同部位作为外植体，利用四种不同类型培养基研究对水曲柳松散愈伤组织诱导产生的不同影响，选出适合诱导松散型和胚性愈伤组织的外植体与培养基组合，进一步探讨悬浮培养以及超低温保存的适宜条件，为水曲柳高效微繁打下基础。主要结果如下：(1)选出较为适宜诱导松散型愈伤组织培养基是 WPM+1 mg/L NAA+0.8 mg/L 6-BA+1 g/L CH+20 g/L 蔗糖+5.3 g/L 琼脂。(2)水曲柳悬浮培养体系的建立确定悬浮培养的培养条件为：接种量为 25 mL 液体培养基中加入 1.5 g 愈伤组织，转速 120 r/min、蔗糖浓度 2%，细胞 15 d 后增殖 1.41 倍；悬浮组织直径在约 2 mm 时易于保持松散型细胞悬浮状态。(3)超低温冷冻保存，在 -196℃条件下进行愈伤组织冷冻保存，保护剂采用 30%甘油+15%乙二醇+15% DMSO+0.4 mol/L蔗糖时，解冻条件为 40℃、暗培养，细胞生命力最高保持在 83.3%，其中愈伤组织恢复生长率为 3.0%。

水曲柳；松散型愈伤组织；组织培养；悬浮培养；超低温冷冻保存