芮存 , 李娟 , 曲延英 , 陈全家 , 汪志星 , 高文伟^* , 张霞^*

新疆农业大学农学院, 农业生物技术重点实验室, 乌鲁木齐, 830052
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 21 篇   
收稿日期: 2017年11月14日    接受日期: 2017年12月14日    发表日期: 2018年07月18日

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为探究 WOX9 基因在棉花体细胞胚胎发育过程中的功能，借助农杆菌介导化学试剂诱导型植物表达载体 pTA7002/GbWOX9 和 pTA7002/GbWOX9 anti 对海岛棉‘新海 16’胚性细胞进行遗传转化，以此利用化学诱导剂在胚性细胞中诱导 GbWOX9 的过量或抑制表达。研究结果表明在菌液 OD600抑0.5~0.6 时进行 15min 的农杆菌侵染并共培养 24 h 之后，将侵染的细胞在 500 mg/L 头孢和 20 mg/L 潮霉素的抗性培养基上筛选继代两次，最终获得若干抗性阳性胚性细胞。进一步将抗性阳性细胞在化学诱导剂 30 滋mol/L 地塞米松处理 5 h 后，通过 qRT-PCR 技术对其进行 GbWOX9 的基因表达鉴定，结果表明与对照组相比，正、反义转基因抗性阳性细胞中的 GbWOX9 基因表达量皆有显著差异。该研究初步建立了以潮霉素为筛选标记的海岛棉遗传转化体系，并在此基础上将 GbWOX9 正义和反义链成功导入‘新海 16’胚性细胞中，为其功能的鉴定提供了参考。

海岛棉；GbWOX9；农杆菌；潮霉素；胚性细胞