刘艳琴 , 王一 , 杨静 , 张扬 , 李成云

云南生物资源保护与利用国家重点实验室, 云南农业大学植物保护学院, 昆明, 650201
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 12 篇   
收稿日期: 2017年07月29日    接受日期: 2017年08月31日    发表日期: 2018年05月22日

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为了研究稻瘟病菌效应蛋白基因功能，本研究构建了稻瘟病菌效应蛋白基因BAS1和BAS4与3×FLAG标签融合的原核表达载体及其与GFP融合的瞬时表达载体。以持有BAS1和BAS4基因的稻瘟病菌株的cDNA为模板，RT-PCR扩增目的基因BAS1和BAS4编码区，选用p3×FLAG-CMV-10为模板扩增3×FLAG基因，分别将BAS1和BAS4与3×FLAG连接到原核表达载体pGEX-4T-1中，获得原核表达载体pGEX-BAS1-3×FLAG和pGEX-BAS4-3×FLAG，测序结果表明克隆到的BAS1、BAS4和3×FLAG序列及连接方向正确。将构建好的原核表达载体转化到表达感受态细胞Transetta (DE3)中得到转化子，利用IPTG诱导表达原核表达产物，SDS-PAGE电泳结果表明，目的蛋白约为40 kD，与理论值相符。为了进一步研究BAS1和BAS4的亚细胞定位，利用同源重组方法构建了pBWA(V)HS-BAS1-GLosgfph和pBWA(V)HS-BAS4-GLosgfp瞬时表达载体。本研究所构建的BAS1和BAS4与3×FLAG融合的原核表达载体及瞬时表达载体将为进一步研究BAS1和BAS4功能及定位提供一定的实验基础。

稻瘟病菌；原核表达载体；瞬时表达载体；效应蛋白