张丽芳 , 方炎明^*

南京林业大学生物与环境学院, 南方现代林业协同创新中心, 亚热带森林生物多样性保护国家林业局重点实验室, 南京, 210037
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 24 篇   
收稿日期: 2017年07月24日    接受日期: 2017年08月14日    发表日期: 2018年12月20日

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为有效利用 SSR-PCR 技术分析国家一级重点保护植物银缕梅的遗传多样性，采用正交试验设计L₁₆(4³)，即 3 因素 4 水平，对影响 SSR-PCR 扩增结果的因素(引物, 模板 DNA 浓度和循环数)进行优化筛选，并在此基础上对聚丙烯酰胺凝胶上样量进行优化，建立了适合银缕梅的最佳 SSR-PCR 反应体系：10 滋L 2伊PCRMix、40 ng 模板 DNA、10 滋mol/L 引物，其余用 ddH₂O 补齐至 20 滋L。PCR 扩增程序为：95℃预变性 15 min，95℃变性 30 s，57.5℃退火 1.5 min，72℃延伸 1 min，30 个循环，循环结束后，60℃延伸 30 min，扩增产物 ４℃保存。聚丙烯酰胺凝胶电泳上样量以 1.5~2.0 滋L 为最佳。利用优化后体系进行引物筛选，从 18 对引物中筛选出 11 对具有多态性引物，说明该反应体系具有良好的稳定性。该体系的建立可以为今后利用 SSR 标记对银缕梅遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究提供基础。

银缕梅；正交设计；SSR-PCR；最佳上样量；引物筛选