白建江¹ , 朴钟泽¹ , 方军¹ , 李刚夑² , 王亚³ , 杨瑞芳¹

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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 19 篇   
收稿日期: 2017年07月17日    接受日期: 2017年08月22日    发表日期: 2018年03月26日

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SBE3是位于水稻第2号染色体上的水稻淀粉分支酶基因，该基因表达量的降低引起水稻抗性淀粉（Resistant starch， RS）含量的提高。本研究应用CRISPR/Cas9系统对SBE3基因进行编辑，根据基因编码区序列（CDS）在第8外显子区域设计长度为20bp的引导序列，化学合成引导序列并构建成sgRNA，将其插入到Cas9质粒骨架载体中，转化农杆菌。通过农杆菌介导的遗传转化方法将构建好的pCAMBIA1300:SBE3sgRNA:Cas9表达载体转入水稻受体材料沪LPR18中。使用PCR扩增转基因阳性植株中含有CRISPR/Cas9靶点的片段并测序验证，确定12个突变单株，其中2个是纯合型，通过后代分离，得到没有潮霉素基因筛选标记的SBE3纯合突变单株，测定其抗性淀粉含量高达10%以上。以上结果表明，本研究已经通过CRIPR/Cas9技术获得稳定的高抗性淀粉水稻纯合突变体材料，为高抗性淀粉育种提供了新的种质资源和创建方法。

水稻；SBE3；CRISPR/Cas9；抗性淀粉