林珲^1,2,3 , 汪伟裁^1,2,3 , 李大忠^1,2,3 , 薛珠政^1,2,3 , 李永平^1,2,3 , 张前荣^1,2,3 , 康玉妹^1,2,3 , 温庆放^1,2,3

1福建省农业科学院蔬菜研究中心, 福州, 350013;
2福建省农业科学院作物研究所, 福州, 350013;
3福建省蔬菜工程技术研究中心, 福州, 350013
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 21 篇   
收稿日期: 2017年06月09日    接受日期: 2017年06月29日    发表日期: 2018年05月22日

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为建立适合于苦瓜的ISSR反应体系，为后续苦瓜瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础，本研究以“609”苦瓜品种作为模板DNA，试验采用单因素试验设计对影响反应体系的DNA模板、引物、dNTP和Taq酶的含量进行优化，并对单因素结果进行L₉(3³)正交试验设计。研究结果表明，苦瓜ISSR：20 µL最佳反应体系为：2 µL的10×Buffer (含Mg²⁺)，30 ng模板DNA，0.25 mmol/L的dNTP，0.5 µmol/L的引物，1.25 U的TaqDNA聚合酶。在此基础上，对优化引物的退火温度，确定最适宜的退火温度。验证优化的最佳反应体系，选用引物cw39132对48个苦瓜品种进行所确立扩增体系的验证，结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富，且特异性强和重复性好，表明本研究所确定的反应体系适用于苦瓜的ISSR分子标记。

苦瓜；ISSR；分子标记；PCR扩增