程西永 , 于仕佳 , 毕惠惠 , 毛伟伟 , 刘晓丹 , 罗肖艳 , 詹克慧 , 许海霞^*

河南农业大学农学院, 河南省粮食作物协同创新中心, 小麦玉米作物学国家重点实验室, 郑州, 450002
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 17 篇   
收稿日期: 2017年05月19日    接受日期: 2017年06月01日    发表日期: 2018年02月28日

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植物类钙调磷酸酶B蛋白CBLs (Calcineurin B-like proteins)和CBL互作蛋白激酶CIPKs (CBL-interacting protein kinases)在应答非生物逆境的钙信号系统中起着重要作用。为了研究小麦TaCIPK3的互作调控网络，以普通六倍体小麦(Triticum aestivum)品种矮抗58的叶片cDNA为模板，PCR扩增获得TaCIPK3的编码序列。TaCIPK3基因开放阅读框(ORF)长1 348 bp，编码447个氨基酸。生物信息学分析显示TaCIPK3的N-端催化结构域含有CIPK家族蛋白的典型激活环，C-端调节域含有该家族高度保守的24个氨基酸NAF基序，具有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶的结构特征。利用酵母双杂交体系对TaCIPK3与TaCBL1/2/3/4/6/7/9进行相互作用鉴定，发现分别转化有pGADT7-TaCIPK3×pGBKT7-TaCBL1、pGADT7-TaCIPK3×pGBKT7-TaCBL2、pGADT7-TaCIPK3×pGBKT7-TaCBL3和pGADT7-TaCIPK3×pGBKT7-TaCBL4的二倍体酵母菌能够在二缺培养基SD/-Trp/-Leu平板上长出白色菌落，同时这些二倍体菌株在四缺培养基SD/-Leu/-Trp/-Ade/-His/X-α-Gal/AbA上能够长出淡蓝色菌落，表明下游的4个报告基因ADE2、HIS3、MEL1和AUR1-C被激活，因此说明TaCIPK3与TaCBL1、TaCBL2、TaCBL3和TaCBL4之间存在互作。本研究结果对进一步研究TaCIPK3的生物学功能以及与TaCBLs的互作网络具有一定的参考作用。

小麦；TaCIPK3；TaCBLs；生物信息学分析；蛋白互作；酵母双杂交检测