杨润蕾^1,2 , 董研¹ , 于晓月¹ , 杨敏生^1*

1河北农业大学林学院, 保定, 071000; 2河北大学生命科学学院, 保定, 071000
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 15 篇   
收稿日期: 2017年04月24日    接受日期: 2017年05月02日    发表日期: 2018年01月25日

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叶绿体是外源基因表达的理想场所。为了探究植物叶绿体转化技术，本研究成功构建了BtCry1Ac基因的烟草叶绿体转化载体，其中以aadA基因作为筛选标记，叶绿体基因组同源片段选用rbcL基因与accD基因。采用基因枪轰击法进行叶绿体转化，以壮观霉素300 mg/L作为初筛浓度，并逐步提高筛选压力，经过3轮筛选后，通过PCR检测，有6个株系检测到了外源Bt基因；同时进行的毒蛋白测定中，有5个株系可检测到Bt毒蛋白，但表达量普遍偏低，T-4的毒蛋白含量最高，为19.32 ng/mL，说明烟草叶绿体基因组中还有大量拷贝没有完全同质化。通过对烟草叶绿体载体构建及转化技术的摸索，将为未来开展其它植物的叶绿体转化研究提供参考。

烟草；叶绿体转化；BtCry1Ac基因；同质化