巨秀婷^{1, 2 *} , 贺宗萍¹

1青海大学农牧学院, 西宁, 810016;
2青海省园林植物研究重点实验室, 西宁, 810016
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 3 篇   
收稿日期: 2017年03月30日    接受日期: 2017年04月23日    发表日期: 2018年01月17日

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        建立最适的PCR反应体系是成功进行ISSR-PCR的关键，且反应的扩增效果易受多种因素的影响，本研究采用正交试验和单因素筛选试验两种方法，选用凤仙花叶片DNA为实验材料，针对影响凤仙花ISSR-PCR反应较大的Mg²⁺、dNTPs、Taq酶、引物、模板DNA这5个因素进行优化并筛选，最终建立凤仙花ISSR-PCR最佳反应体系：25 μl PCR反应体积中，Mg²⁺浓度为2.0 mmol/L、引物浓度为0.4 μmol/L、模板DNA浓度为150 ng、dNTPs浓度为0.15 mmol/L、Taq酶为0.5 U。利用该体系筛选出14条可用于凤仙花ISSR-PCR扩增的引物。通过建立凤仙花属最佳ISSR-PCR反应体系，为研究凤仙花属植物提供分子标记水平上的理论依据和技术方法。

凤仙； ISSR-PCR； 正交设计； 单因素试验