甘肃中医药大学药学院, 兰州, 730000
作者
通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2017 年, 第 15 卷, 第 114 篇
收稿日期: 2016年12月01日 接受日期: 2016年12月22日 发表日期: 2017年01月09日
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《分子植物育种》印刷版, 2017 年, 第 15 卷, 第 114 篇
收稿日期: 2016年12月01日 接受日期: 2016年12月22日 发表日期: 2017年01月09日
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摘要
通过单因素与中心复合设计相结合的方法建立优化红芪ISSR-PCR反应体系,并筛选引物,优化电泳时间及扩增循环数。建立的红芪ISSR-PCR反应体系为:25 µL反应体系中10×PCR Buffer (Mg 2+)3.5 µL、模板DNA (30 ng/µL) 2 µL、PCR扩增引物2 µL、TaqDNA聚合酶为1.25 U、dNTPs 为2 µL,dd H2O 14.5 µL,建立的扩增程序:94℃预变性5 min,开始34个循环;94℃变性30 s,后据不同退火温度的引物复性45 s,72℃延伸2 min,循环结束后72℃延伸7 min。本研究筛选出红芪扩增的引物17条;PCR反应产物电泳时间为120 min,最佳循环数为34,建立了稳定的体系,为进一步研究红芪的遗传多样性及遗传结构提供了帮助。
关键词
红芪;ISSR-PCR体系;单因素;中心复合设计
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