吕志华^1,2 , 郭华春¹ , 李彩斌¹ , 杨慧菊¹ , 王琼¹

1云南农业大学, 薯类作物研究所, 昆明, 650201;
2大理大学, 农学与生物科学学院, 大理, 671003
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《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14 卷, 第 51 篇   
收稿日期: 2016年05月27日    接受日期: 2016年06月10日    发表日期: 2016年08月21日

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本研究以云南地方品种羊角洋芋为材料，采用单因素与L₁₆(4⁵)正交设计相结合的方法，对影响RSAP—PCR反应体系的Mg²⁺ 浓度、Taq酶量、dNTPs浓度、模板DNA量和引物浓度进行优化，综合选取得到最佳反应体系。结果表明：马铃薯RSAP-PCR最佳反应体系为：20 μL体系中，Mg²⁺浓度4.00 mmol/L，Taq酶2.00 U，dNTPs浓度0.45 mmol/L，模板DNA 60 ng，引物浓度0.50 mmol/L。应用该体系对退火温度进行优化，得到RSAP的两步最佳退火温度分别为35℃和51℃。利用10个马铃薯品种验证所得PCR体系，证明该体系稳定，可靠，重复性好，可为今后利用RSAP分子标记评价马铃薯的遗传多样性、开展品种选育、构建遗传图谱提供技术支持。

马铃薯；RSAP；体系优化；退火温度