刘绵学 , 伏毅 , 王艳 , 谢艳 , 黄敏

四川省原子能研究院生物技术研究所/辐照保藏四川省重点实验室，成都，601010
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13 卷, 第 8 篇   doi: 10.5376/..00.
收稿日期: 2015年07月30日    接受日期: 2015年08月17日    发表日期: 2015年12月17日

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钴(Co)胁迫会对植物产生多种毒害作用。为研究其植物毒性作用机理，需构建Co胁迫条件下紫花苜蓿的实时荧光定量PCR反应体系。研究选取了6个持家基因(Actin2, GAPDH, UBI, 18S, MSC27, EF1-α)作为备选内参基因，以紫花苜蓿植株为实验材料，检测Co胁迫条件下备选内参基因的表达稳定性。通过RefFinder和geNorm软件分析，确定Co胁迫下紫花苜蓿最佳内参基因组合为Actin2 和18S。将四种根际促生菌分别接种紫花苜蓿，并使用100 mg/L CoCl₂对接种后植株进行处理，使用筛选内参引物检测生育酚合成关键基因尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)的转录水平。研究结果显示Co胁迫可使HPT基因转录水平发生显著下调，根际促生菌铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 1401可降低Co胁迫对苜蓿植株的毒害作用，接种该菌株植株的HPT基因相对表达水平为对照样本的6.63倍，植株株高和生物量分别达到对照样本的140.86%和193.62%。根据测试样本中HPT基因转录水平与植株Co耐受能力的变化趋势，推测紫花苜蓿的Co耐受能力与生育酚的合成途径或存在紧密联系。

紫花苜蓿；内参基因筛选；钴胁迫；HPT基因