刘峰^1* , 阮盈盈²

1 宁波城市职业技术学院景观生态学院, 宁波, 315100; 2 宁波大学海洋学院, 宁波, 315211
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19 卷, 第 10 篇   
收稿日期: 2021年07月13日    接受日期: 2021年07月23日    发表日期: 2022年02月17日

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5- 烯醇式丙酮莽草酸 -3- 磷酸合成酶(EPSPS)是莽草酸合成通路中关键的合成酶，也是除草剂草甘膦的靶向酶。为了研究明日叶 EPSPS 基因的结构及功能，基于明日叶转录组数据库信息，利用 RT-PCR 的方法克隆得到明日叶的 EPSPS 基因，命名为 AgEPSPS，构建 pET-AgEPSPS 原核载体，验证 AgEPSPS 基因功能。克隆得到明日叶 AgEPSPS 基因的 ORF 全长为 1 578 bp，编码 525 个氨基酸，分子质量为 55.83 kD，等电点为 7.93。它与胡萝卜的 EPSPS 蛋白具有高度的同源性；AgEPSPS 基因在明日叶的不同组织中均有表达，其中叶片中的表达量最高。在 3 mmol/L 的草膦水溶液处理后，AgEPSPS 基因表达量明显上调，在 24 h 后表达量最高。在抗性试验中，含有重组的 pET-AgEPSPS 质粒的大肠杆菌可以在 80 mmol/L 草甘膦的液体 LB 培养基中生长，说明其具有一定的草甘膦抗性。

明日叶(Angelica keiskei)；EPSPS；草甘膦；抗性