包金花^* , 杨恒山 , 庄得凤 , 斯日古楞 , 陈晶 , 何陈林 , 李志军 , 李旭新

内蒙古民族大学农学院,通辽, 028043
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2022 年, 第 20 卷, 第 23 篇   
收稿日期: 2021年03月13日    接受日期: 2021年03月19日    发表日期: 2022年07月25日

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为了建立金莲花 ISSR-PCR最佳反应体系，本研究以内蒙古自治区境内野生金莲花为试验材料，采用 L₁₆(4⁵)正交实验设计，对影响 ISSR-PCR扩增结果的 dNTPs、Taq DNA聚合酶、DNA模板、Mg²⁺、引物 5个因素进行优化筛选，对反应程序进行优化。结果显示，每个因素都具有极显著差异，影响最大的为 dNTPs，其余依次为Taq DNA聚合酶、DNA模板、引物，影响最小的为 Mg²⁺浓度。最佳反应体系为：DNA模板 30 ng，引物 0.2 μmol/L，Taq DNA聚合酶 0.075 U/20 μL，dNTPs 0.15 mmol/L，Mg²⁺ 1.0 mmol/L，反应总体积 20 μL。最佳扩增程序为：94 ℃预变性 5 min，94 ℃变性 30 s，52 ℃退火 1 min，72 ℃延伸 100 s，最后 72 ℃延伸 7 min，共 38个循环，4 ℃保存。采用优化后的体系对金莲花不同居群进行验证，证明优化后体系扩增出明亮清晰的条带且重复性好，可用于后续金莲花遗传多样性分析。

金莲花；ISSR-PCR；反应体系；正交实验