技术主题/Technology Feature
冬瓜SSR-PCR体系优化及引物筛选 
潘珍珍1,2,3 
,
吴才君1 ,
刘文睿2,3 ,
江彪2,3 ,
谢大森2,3 
,
吴才君1 ,
刘文睿2,3 ,
江彪2,3 ,
谢大森2,3
1 江西农业大学, 南昌, 300045;
2 广东省农业科学院蔬菜研究所, 广州, 510640; 3广东省蔬菜新技术研究重点实验室, 广州, 510640;
3 广东省蔬菜新技术研究重点实验室, 广州, 510640
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13 卷, 第 27 篇 doi: 10.13271/j.mpb.013.000898
收稿日期: 2014年08月02日 接受日期: 2014年11月28日 发表日期: 2015年01月12日
2 广东省农业科学院蔬菜研究所, 广州, 510640; 3广东省蔬菜新技术研究重点实验室, 广州, 510640;
3 广东省蔬菜新技术研究重点实验室, 广州, 510640
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13 卷, 第 27 篇 doi: 10.13271/j.mpb.013.000898
收稿日期: 2014年08月02日 接受日期: 2014年11月28日 发表日期: 2015年01月12日
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摘要
本研究利用L16(54)正交试验设计研究了影响冬瓜SSR-PCR的五个因子(10× Buffer (含Mg2+), dNTP, DNA, 引物, rTaq)，研究结果表明Buffer (含Mg2+)和rTaq对PCR影响最明显，最终筛选出最佳反应体系：10× Buffer 2.0 μL (1× Buffer)，dNTP 2.0 μL (200 μmol/μL)，DNA 0.6 μL (6 ng/μL)，引物0.4 μL (0.2 μmol/L)。体系体积为20 μL，循环数为35。引物筛选程序为：94℃预变性3 min，94℃变性45 s，58℃~68℃复性30 s，5个循环，每个循环退火温度降2℃，72℃延伸1 min，94℃变性30 s，50℃~58℃复性1 min，8个循环，每个循环退火温度降低1℃，72℃延伸1 min，94℃变性30 s，50℃复性30 s，72℃延伸1 min，共30个循环，72℃延伸7 min。本研究建立了适合冬瓜的SSR反应体系和引物多态性筛选程序。
关键词
冬瓜；SSR-PCR；体系优化；引物筛选
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