技术主题/Technology Feature

冬瓜SSR-PCR体系优化及引物筛选  

潘珍珍1,2,3 , 吴才君1 , 刘文睿2,3 , 江彪2,3 , 谢大森2,3
1 江西农业大学, 南昌, 300045;
2 广东省农业科学院蔬菜研究所, 广州, 510640; 3广东省蔬菜新技术研究重点实验室, 广州, 510640;
3 广东省蔬菜新技术研究重点实验室, 广州, 510640
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13 卷, 第 27 篇   doi: 10.13271/j.mpb.013.000898
收稿日期: 2014年08月02日    接受日期: 2014年11月28日    发表日期: 2015年01月12日
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摘要
本研究利用L16(54)正交试验设计研究了影响冬瓜SSR-PCR的五个因子(10× Buffer (含Mg2+), dNTP, DNA, 引物, rTaq),研究结果表明Buffer (含Mg2+)和rTaq对PCR影响最明显,最终筛选出最佳反应体系:10× Buffer 2.0 μL (1× Buffer),dNTP 2.0 μL (200 μmol/μL),DNA 0.6 μL (6 ng/μL),引物0.4 μL (0.2 μmol/L)。体系体积为20 μL,循环数为35。引物筛选程序为:94℃预变性3 min,94℃变性45 s,58℃~68℃复性30 s,5个循环,每个循环退火温度降2℃,72℃延伸1 min,94℃变性30 s,50℃~58℃复性1 min,8个循环,每个循环退火温度降低1℃,72℃延伸1 min,94℃变性30 s,50℃复性30 s,72℃延伸1 min,共30个循环,72℃延伸7 min。本研究建立了适合冬瓜的SSR反应体系和引物多态性筛选程序。
 
关键词
冬瓜;SSR-PCR;体系优化;引物筛选

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《分子植物育种》印刷版
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