张会轩^1,2 , 李文靖¹ , 王钧^1,2 , 贺睿^1,2 , 李毅¹ , 胡延萍^1*

1 中国科学院西北高原生物研究所, 西宁, 810008; 2 中国科学院大学, 北京, 100049
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2022 年, 第 20 卷, 第 19 篇   
收稿日期: 2020年12月14日    接受日期: 2020年12月25日    发表日期: 2023年04月18日

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为了获得伏毛铁棒锤稳定可靠的 ISSR-PCR 反应体系，本研究对总 DNA 提取的 CTAB 法进行改良，并采用正交试验设计方法，对影响伏毛铁棒锤 ISSR-PCR 扩增结果的 Taq DNA 聚合酶、Mg²⁺、dNTP、引物、模板 DNA 五个因素进行优化。在此基础上筛选多态性好的 ISSR 引物，并用梯度法确定各个引物的最适退火温度。结果显示：改良 CTAB 法所提 DNA 的质量和纯度高；伏毛铁棒锤 20 μL ISSR-PCR 最佳反应体系为：0.6 U Taq DNA 聚合酶，1.5 mmol/L Mg²⁺，0.125 mmol/L dNTP，0.5 μmol/L 引物，30 ng 模板 DNA；以最佳反应体系为基础，从 ISSR 引物(UBC801~UBC900)中筛选获得 12 条多态性好的 ISSR 扩增引物，并确定了各引物的最适退火温度。该最佳反应体系能在伏毛铁棒锤不同样品中扩增出清晰且重复性好的条带，可用于后续伏毛铁棒锤遗传多样性的研究。

伏毛铁棒锤；ISSR-PCR；正交试验设计；引物筛选