何仁锋¹ , 冯尚国¹ , 陈喆¹ , 沈晓霞² , 沈宇峰² , 王志安² , 王慧中¹

1 杭州师范大学生命与环境科学学院, 浙江省药用植物种质改良和质量监控重点实验室, 杭州, 310036;
2 浙江省中药研究所, 杭州, 310023
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13 卷, 第 17 篇   doi: 10.13271/j.mpb.013.000367
收稿日期: 2014年06月04日    接受日期: 2014年07月30日    发表日期: 2014年09月02日

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为进一步开发利用药用菊花种质资源和开展分子标记辅助选择育种，本研究利用L₂₅(5⁶)正交设计对影响药用菊花SSR-PCR反应的模板DNA、Mg²⁺、dNTPs、Taq酶、引物等5个因素进行优化，并对SSR引物进行筛选。结果建立了药用菊花SSR-PCR最佳反应体系(20 μL)：模板DNA 60 ng，正、反向引物0.25 μmol/L，dNTPs 0.3 mmol/L，Mg²⁺ 3.0 mmol/L，Taq酶1.5 U。运用优化后的反应体系，从136对引物中成功筛选出了扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物57对，大多数条带大小集中在100~500 bp，不同引物扩增的条带数为5~15条。优化的SSR-PCR反应体系在多个药用菊花品种遗传多样性研究中得到了验证，获得了稳定性、重复性良好和多态性丰富的扩增图谱。该体系的建立可为今后利用SSR标记对药用菊花种质鉴定、遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究提供了依据。

药用植物；菊花；正交设计；SSR-PCR；体系优化；引物筛选