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《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19 卷, 第 30 篇
收稿日期: 2020年02月05日 接受日期: 2020年02月10日 发表日期: 2021年05月12日
为获得同步化的人工种胚,以半夏疏松愈伤组织为试验材料,采用悬浮培养的方法,探讨温度、咖啡因、蔗糖浓度对半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化作用,为半夏人工种子制作提供同步化种胚。结果表明:以 MS 为基本培养基,添加 1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH 进行悬浮培养,温度为 8℃,处理 12 h,恢复 36 h,同步化效果最好,细胞分裂指数为 13.86%;咖啡因浓度为 2.00 mmol/L,处理 2 h,恢复 48 h,效果较好,细胞分裂指数为 9.42%;蔗糖浓度为 40 g/L,处理 5 d,恢复 4 d,效果一般,细胞分裂指数为 5.33%。分别先后继代 3 次于 MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH进行膨大培养及 MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+10 g/L sucrose+300 mg/L CH 进行分化培养。温度处理组微细胞团为 42.33 个,种胚分化率为 71.11%;咖啡因处理组微细胞团为 34.33 个,种胚分化率为 55.56%;蔗糖处理组微细胞团为 40 个,种胚分化率为 57.78%。因此,半夏悬浮培养细胞同步化形成人工种胚的适宜条件为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH,8 ℃处理 12 h,恢复 36 h,再转接进膨大及分化培养基继续培养。本研究为半夏人工种子生产提供技术参考。