王斯彤^*

辽宁省沙地治理与利用研究所, 阜新, 123000
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19 卷, 第 25 篇   
收稿日期: 2020年02月03日    接受日期: 2020年02月07日    发表日期: 2021年05月12日

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为建立胡桃楸天然林 ISSR-PCR 反应体系，本实验从 DNA 的提取到扩增进行了研究。通过对比CTAB 和试剂盒两种方法，发现胡桃楸最佳 DNA 提取方法为试剂盒法。利用正交试验设计法确定了胡桃楸ISSR-PCR 反应最佳体系，并对影响胡桃楸 PCR 反应的 Taq 酶浓度、Mg²⁺浓度、dNTP 浓度等因素进行了优化。最终获得胡桃揪 ISSR-PCR 反应的最优扩增程序为：95 ℃预变性 3 min，95 ℃变性 30 s，48.3 ℃复性30 s，72℃延伸 1min，28 次循环，最后 72℃终延伸 5min。优化胡桃楸 ISSR-PCR 的最佳反应体系为：Taq DNA聚合酶浓度为 0.75 U/20 μL、Mg²⁺浓度为 1.75 mmol/L、dNTP 浓度为 0.20 mmol/L、引物浓度为 0.35 μmol/L、DNA 模板浓度为 150 ng/20 μL。该研究为以后利用 ISSR 分子标记技术研究胡桃楸的亲缘关系和遗传多样性提供高效的技术手段。

胡桃楸；ISSR 分子标记；体系优化