马璐琳^1,2 , 段青¹ , 杜文文¹ , 崔光芬¹ , 贾文杰¹ , 王祥宁¹ , 王继华^1*

1 云南省农业科学院花卉研究所, 云南省花卉育种重点实验室, 国家观赏园艺工程技术研究中心, 昆明, 650205; 2 南京农业大学园艺学院, 南京, 210095
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《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19 卷, 第 21 篇   
收稿日期: 2020年01月13日    接受日期: 2020年01月17日    发表日期: 2021年05月11日

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F3'5'H 是催化合成蓝色花色素的关键酶，F3'5'H 蛋白序列中一段编码 9 个氨基酸的特殊序列区段可能与 F3'5'H 催化合成的蓝色花色素有关，但该特殊序列区段的催化功能和作用机制尚不清楚。为了探究PgF3'5'H 中，该特殊序列结构的催化功能及作用机制，本研究通过重叠延伸 PCR 技术去除 PgF3'5'H 编码 的9 个氨基酸特殊序列区段，获得缺失突变型基因；将 PgF3'5'H野生型及其突变型基因同时导入毕赤酵母；通过 qRT-PCR 检测野生基因及其突变基因在酵母中转录水平基因表达量的差异；通过 SDS-PAGE 检测PgF3'5'H 野生型基因及其突变型基因在酵母中的合成蛋白量的差异。qRT-PCR 分析结果显示 PgF3'5'H野生型基因较其突变型在酵母中呈现更高的表达量；SDS-PAGE 电泳结果显示重组子分泌生成了分子量大小约为 52.0 kD 的目标蛋白，且野生型蛋白量相比其突变型蛋白量高。因此，推测 PgF3'5'H 蛋白序列中 9 个氨基酸的特殊序列与调控该基因在 RNA 和蛋白水平的表达量有关，进而可能影响该基因的催化功能。研究结果将为观赏植物蓝色花色形成分子机制及蓝色花色分子育种提供一定研究基础。