梁晨^1,2 , 周芸^1,2 , 安邦^1,2 , 罗红丽^1,2*

1海南大学热带作物学院,海口, 570228; 2海南大学,海南省热带生物资源可持续利用重点实验室,海口, 570228
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 20 篇   
收稿日期: 2020年01月06日    接受日期: 2020年01月15日    发表日期: 2020年10月30日

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天然橡胶作为中国重要的工业原料和战略资源，其产量一直受到病害的影响，其中包括橡胶树炭疽病。胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和尖孢炭疽菌(Colletotrichum acutatum)作为橡胶树炭疽病的致病因子，均可以引起橡胶树炭疽病，但胶孢炭疽菌的致病性远强于尖孢炭疽菌的致病性。本研究通过比较胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌的基因组测序结果，利用 RT-PCR技术扩增了一个胶孢炭疽菌特有效应蛋白基因，命名为CgE23。生物信息学分析表明，CgE23 编码一条 212个氨基酸的多肽，分子质量为 22.7 kD，其中第 1~第16位氨基酸是典型的信号肽序列，第 106~第 208位的氨基酸编码一个 HNH保守结构域。依据同源重组和基因回补原理，构建了CgE23 基因的敲除载体 pCB1532-CgE23-Sur和互补载体 Cgniad-CgE23-Flag-HPH，并通过 PEG介导转化法将其转入到胶孢炭疽菌原生质体细胞，分别经过氯嘧磺隆(Sur)和潮霉素(HPH)抗性筛选和分子鉴定后，成功获得CgE23 基因的敲除突变体∆CgE23和基因互补突变株 Res-∆CgE23。进一步研究发现，∆CgE23的孢子产量显著低于野生型和互补株 Res-∆CgE23，基因互补株 Res-∆CgE23 的孢子产量与野生型并无明显差异。以上结果表明CgE23 与胶孢炭疽菌的产孢能力有关。本研究结果可为进一步研究胶孢炭疽菌特有效应蛋白基因CgE23 的功能和致病机制提供帮助。
 

胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)；CgE23 基因；基因敲除；基因回补；孢子产量