秦智 , 陈彦伯 , 李雨婷 , 李慧颖 , 周莹 , 崔喜艳⁸

吉林农业大学生命科学学院, 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心, 长春, 130118
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19 卷, 第 15 篇   
收稿日期: 2019年11月16日    接受日期: 2019年12月27日    发表日期: 2021年03月22日

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氨基酸通透酶(amino acid permease，AAPs)是一种跨膜转运蛋白，广泛参与植物体内氨基酸的吸收与转运。本试验通过重叠延伸PCR技术对氨基酸通透酶基因进行单碱基定点突变，以便为今后研究植物对外源氮的吸收与利用率奠定基础。本研究根据Tair数据库中拟南芥AtAAP1基因序列，利用Primer Premier 5.0软件设计含有1个突变位点的2对互补的定点突变引物和1对带有pCAMBIA3301-GFP载体的多克隆位点的接头引物，以野生型拟南芥叶片的cDNA为模板，进行3次PCR扩增，将获得的突变基因片段连接到pCAMBIA3301-GFP载体上，转化DH5α感受态细胞。将筛选的阳性菌株送至公司测序，测序结果表明拟南芥AtAAP1基因的第908位碱基A突变为T，实现了单碱基定点突变，这与预计结果相同，说明成功依靠重叠延伸PCR技术做到目的基因的定点突变。该技术能方便快速地获得定点突变序列，为进一步研究AtAAP1基因的功能奠定了基础。

重叠延伸 PCR 技术；单碱基； 定点突变