丁雯¹ , 李泽¹ , 杜晨晖¹ , 闫艳² , 马锦鸿¹ , 裴香萍^1*

1 山西中医药大学中药与食品工程学院, 太原, 030619; 2 山西大学, 中医药现代研究中心, 太原, 030006
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 27 篇   
收稿日期: 2019年10月31日    接受日期: 2019年11月07日    发表日期: 2021年01月06日

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本研究通过正交试验对酸枣仁ISSR-PCR反应体系中DNA模板用量、引物浓度、2×Taq Master Mix含量等参数进行优化，以建立酸枣仁的ISSR-PCR最佳反应体系。基于优化结果，从100条引物中共筛选出12条扩增结果良好、条带清晰的ISSR引物，并通过梯度PCR试验，对每一条引物的最佳退火温度进行确定。结果表明酸枣仁的ISSR-PCR最佳反应体系（20.0 μL）为DNA模板50.0 ng、引物0.6 μmol/L和2×Taq Master Mix 11.0 μL；扩增程序为95℃预变性3 min；94℃变性25 s，不同引物最佳退火温度下退火25 s，72℃延伸1 min，35个循环；72℃延伸5 min；4℃保存。该体系扩增获得的条带清晰、稳定且多样性良好，对于酸枣仁药材的亲缘关系和遗传多样性等分析研究具有一定的指导意义。

酸枣仁；ISSR；引物筛选；优化