刘洁 , 江静怡 , 徐吉臣

北京林业大学林木育种国家工程实验室, 北京, 100083
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2014 年, 第 12 卷, 第 20 篇   doi: 10.13271/j.mpb.012.000554
收稿日期: 2014年01月10日    接受日期: 2014年02月17日    发表日期: 2014年03月05日

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推荐引用：

Liu J., Jiang J.Y., and Xu J.C., 2014, An Improved Method for the Extraction of Total RNA from Spruce Needles, Fenzi Zhiwu Yuzhong (Molecular Plant Breeding), 12(3): 554-561 (刘洁, 江静怡, 徐吉臣, 2014, 一种改良的云杉针叶总RNA 提取方法, 12(3): 554-561)

云杉(Picea)是一种重要的绿化和用材树种。根据云杉的特点，本研究提出了改良的云杉RNA 提取方法即SDS 酚-LiCl 法，以不同种云杉(青杄, 白杄和红皮)的针叶为试验材料，采用TRIzol 法、CTAB 法、改进的SDS 酚法和SDS 酚-LiCl 法提取RNA，并进行了质量验证。结果表明：TRIzol 法不能提取云杉针叶总RNA；CTAB 法和改进的SDS 酚法提取的RNA 质量少，并存在不同程度的多糖、多酚和DNA 污染。SDS 酚-LiCl法适当增加了提取液中SDS、PVP 以及茁- 巯基乙醇的浓度，结合酸性条件、高盐溶液(3 mol/L NaAc)和LiCl等减少DNA、多糖污染的步骤，最终提取的RNA 质量好、得率高。进一步反转录后，利用特异引物进行扩增验证，发现扩增的片段条带清晰，得率高，片段大小符合预期。研究结果表明，SDS 酚-LiCl 法可以较好的提取云杉RNA 并进行后续的基因表达及转录组研究，为推动云杉在转录水平上的研究奠定了基础。

云杉；RNA；多糖；多酚；DNA；SDS酚-LiCl法