研究报告
CRISPR/Cas9 介导的拟南芥 TT1 基因的敲除 
李麟芳 
,
李新 ,
肖麓 * 
,
李新 ,
肖麓 *
青海大学农林科学院, 青海省春油菜遗传改良重点实验室, 国家油菜改良中心青海分中心, 农业部春油菜科学观测实验站, 青海省春油菜研究
开发中心, 西宁, 810016
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 16 篇
收稿日期: 2019年09月15日 接受日期: 2019年09月25日 发表日期: 2020年06月12日
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 16 篇
收稿日期: 2019年09月15日 接受日期: 2019年09月25日 发表日期: 2020年06月12日
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摘要
在菜油品质上黄籽相较于褐籽更为优良，且更易于合成高质量的生物柴油。已有研究表明 TT1(TRANSPA RENT TESTA 1)基因是类黄酮代谢途径中的关键基因，为了通过 CRISPR/Cas9 基因编辑载体验证TT1 基因在白菜型油菜中的功能，本研究先在拟南芥中进行了 TT1 基因的编辑。构建了CRISPR/Cas9 TT1 基因编辑载体，通过农杆菌介导侵染拟南芥花序的遗传转化方式将编辑载体引入拟南芥 Columbia生态型，通过表型观察发现 T1 代 12 株阳性苗中产生了 11 株表型株，其中 1 株表现为褐籽，2 株表现为黄籽，9 株表现为黄籽和褐籽的嵌合。测序检测分析其突变型结果发现，TT1 靶位点处有单碱基缺失、单碱基插入、多个碱基缺失、碱基缺失后插入以及两个靶位点之间多个碱基缺失的多种突变类型。T2 代获得一株纯合突变体，TT1两个靶位点之间产生 79 bp 的碱基缺失，且全株表现为黄籽。本研究为 CRISPR/Cas9 载体在白菜型油菜中TT1 基因功能验证提供借鉴，并为其它作物 TT1 同源基因的功能验证提供了新的突变体材料。
关键词
拟南芥；CRISPR/Cas9；TT1；粒色； 突变分析
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