杨帆^1,2 , 夏馨蕊^1,2 , 沈李元^1,2 , 叶建仁^1,2 , 朱丽华^1,2*

1 南京林业大学林学院, 南京, 210037; 2 南京林业大学, 南方现代林业协同创新中心, 南京, 210037
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 31 篇   
收稿日期: 2019年05月27日    接受日期: 2019年06月07日    发表日期: 2020年08月27日

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本实验以抗松针褐斑病湿地松胚性愈伤组织 27-1 为材料，运用正交实验方法探究其超低温冷冻保存方法。结果表明：预培养时间、二甲基亚砜(DMSO)浓度、蔗糖浓度、聚乙二醇(PEG) 8000 浓度和解冻温度对解冻后愈伤组织的活性均有显著影响。结合解冻后愈伤组织活力及其恢复生长情况，得出效果较好的超低温保存方法为：继代培养 10~12 d 生长状态良好的愈伤组织，添加 0.5 mol/L 蔗糖的高渗培养基预培养 36 h；5% DMSO，15% PEG 4000，0.5 mol/L 蔗糖 3 种冷冻保护剂组合使用，程序降温至 -80℃停留 30 min 后投入液氮罐中保存；32℃水浴解冻，蔗糖溶液清洗后转接至 LP 培养基上恢复生长。在此程序处理下，冷冻 90 d的愈伤组织 1 个月后可恢复再生，再生率最高达 100%，再生愈伤组织生长状态良好并依然保持分化成熟体胚的能力。
 

湿地松(Pinus elliottii)；胚性愈伤组织；超低温保存