陈红 , 张绍山 , 肖婕妤 , 陈艾萌 , 陈治宇 , 王曦旎 , 吴卫 ^*

四川农业大学农学院,成都, 611130
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 13 篇   
收稿日期: 2019年04月03日    接受日期: 2019年04月10日    发表日期: 2020年05月27日

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尿苷二磷酸糖基转移酶(uridine diphosphate glycosyltransferases, UGTs)催化糖基转移反应，与植物次生代谢密切相关。本研究根据甜叶菊(Stevia rebaudiana)转录组数据库，克隆到一个催化莱鲍迪 D苷(rebaudioside D, RD)合成的新型糖基转移酶候选基因，对其开展生物信息学分析。结果表明，该基因开放阅读框长 1 380 bp，编码 459 个氨基酸，等电点(pI)预测为 5.54，理论分子量约 49.66 kD，系统发育分析表明该基因与向日葵中的 UGT89A2 同源，故将其命名为 SrUGT89A 2。构建 pET28a-SrUGT89A 2 原核表达载体，并在大肠杆菌(BL21(DE3))中诱导表达得到重组蛋白，HPLC 检测表明粗酶液能催化甜叶菊提取液形成一个新的色谱峰，该峰保留时间与莱鲍迪 D 苷一致。经进一步纯化 UGT89A2 蛋白，添加不同甜菊糖苷标准品为催化底物，但未鉴定出该蛋白催化的具体糖苷。该潜在催化甜菊糖 RD 苷合成的新型糖基转移酶基因 SrUGT89A 2 的发现，为 RD苷的生物合成和甜菊糖苷的生物途径研究提供新的理论依据。
 

甜叶菊(Stevia rebaudiana)；SrUGT89A2； RD苷；基因克隆；功能分析