李舒文 , 晁跃辉^* , 韩烈保^*

北京林业大学草业与草原学院, 北京, 100083
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 23 篇   
收稿日期: 2019年03月30日    接受日期: 2019年04月16日    发表日期: 2020年06月24日

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为了构建具有发夹结构的 RNAi 表达载体来研究拟南芥 AtZFN3 基因表达的效果。根据拟南芥(Arabidopsis thaliana)锌指蛋白 AtZFN3 基因序列，设计含有酶切位点的两对特异性引物。以拟南芥 cDNA 为模板，分别合成用于构建干扰载体的正、反义 DNA 片段，将正、反义片段分别插入表达载体 pART27 的相应位置上，构建含有发夹结构的 RNAi 载体 pART-ZFN3。利用农杆菌介导法，将 pART-ZFN3 转化到拟南芥中，PCR 检测证实获得了 5 株转基因植株，经荧光定量 PCR 检测，证明了转基因植株中 AtZFN3 基因表达量显著低于未转基因的植株。结果表明：具有发夹结构的 RNAi 载体 pART-ZFN3 已构建成功，它对拟南芥AtZFN3 基因的表达具有抑制作用，为深入分析拟南芥 AtZFN3 基因功能提供了基础。

拟南芥(Arabidopsis thaliana)；AtZFN3；锌指蛋白；RNAi