杜旋¹ , 刘娜¹ , 鲁博²

1 上海市农业科学院设施园艺研究所, 上海市设施园艺技术重点实验室, 上海, 201403; 2 上海市农业科学院农业科技信息研究所, 上海, 201403
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17 卷, 第 24 篇   
收稿日期: 2019年01月17日    接受日期: 2019年02月27日    发表日期: 2020年02月12日

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为了探索适用于节瓜 ISSR-PCR 反应的反应体系以及得到适用于该体系的 ISSR 引物，首先利用正交实验的方法对节瓜 ISSR-PCR 反应体系的三因素(模板, 2伊sanTaq PCR mix 预混液, 引物)的工作浓度进行优化。然后依据 Tm 值的差异将引物分成了三组，每组分别设定不同的退火温度，以节瓜基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增，经 2%琼脂糖凝胶电泳和 UVP 成像，结果表明，第二组引物扩增条带的数目、清晰度明显优于第一组和第三组的引物扩增的条带，第二组 45℃退火条件下的扩增情况明显优于在 40℃退火条件下的扩增。因此，通过实验与分析，确定了节瓜 ISSR-PCR 反应体系是 DNA 模板(50 ng/滋L) 2 滋L、2伊sanTaq PCR mix预混液 10 滋L、引物(10 滋mol/L) 1 滋L，筛选到了 18 条适合在节瓜的 ISSR-PCR 反应中应用的引物，其最适合的退火温度是 45℃。

节瓜(Benincasa hispida Cogn. var. chieh-qua How.)；ISSR-PCR；正交设计；引物筛选；退火温度