宁花¹ , 郑成淑¹ , 王文莉¹ , 朱翠英¹ , 李朝晖² , 张艳敏³

1 山东农业大学园艺科学与工程学院, 作物生物学国家重点实验室, 国家苹果工程技术中心, 泰安, 271018;
2 山东农业大学林学院, 泰安, 271018;
3 山东农业大学生命科学学院, 泰安, 271018
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2014 年, 第 12 卷, 第 20 篇   doi: 10.13271/j.mpb.012.000349
收稿日期: 2013年07月29日    接受日期: 2013年08月28日    发表日期: 2013年10月31日

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本研究以苔草属植物10个野生种为试材，采用L₁₆(4⁵)正交试验设计，对影响ISSR-PCR反应的Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、dNTPs、引物及模板DNA以及退火温度、循环次数等因素进行优化试验。研究结果表明，苔草属植物的最优ISSR-PCR反应体系，即25 μL反应体积中，含Taq DNA聚合酶1.5 U，Mg²⁺ 1.5 mmol/L，DNA模板150 ng，引物0.24 μmol/L，dNTPs 0.25 mmol/L。苔草属植物的最佳扩增程序，即：94℃预变性3 min；94℃变性30 s，退火45 s，72℃延伸1.5 min，38个循环；72℃延伸7 min；4℃保存。采用优化后的体系对10份苔草属植物进行扩增，能扩增出清晰明亮的条带，表明该反应体系和扩增程序适于苔草属植物的ISSR分析，为进一步开展苔草属植物的遗传多样性分析、分子系统学研究及种质资源评价奠定了基础。 

苔草属；ISSR；分子标记；正交设计；体系优化