廖小淼 , 何其光 , 刘耀 , 徐良向 , 龙熙平 , 刘文波 , 张宇 , 林春花 , 缪卫国

海南大学植物保护学院, 热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室, 海口, 570228
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17 卷, 第 7 篇   
收稿日期: 2018年11月07日    接受日期: 2018年12月12日    发表日期: 2019年05月09日

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HOG MAPK 途径参与植物病原真菌生长发育、致病和对杀菌剂敏感性等过程，CsPbs2 基因是HOG MAPK 信号通路的关键成员。为研究 CsPbs2 蛋白的互作蛋白及其调控机制，本研究克隆了橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense) CsPbs2 基因，构建融合蛋白表达载体，利用 SDS-PAGE 和 Western Blot 检测蛋白表达。结果显示橡胶树炭疽菌(C. siamense)的 CsPbs2 基因全长 2 051 bp，编码 667 个氨基酸，包含个 1 个内含子，具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域。CsPbs2 基因在进化关系上与球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)的 Pbs2基因有最近的亲缘关系。构建的 GST-CsPbs2 蛋白融合表达载体在供试条件下(IPTG: 0.6 mmol/L, 0.8 mmol/L,
1.0 mmol/L 温度 16℃和 25℃)均可较好诱导表达，GST-CsPbs2 融合蛋白大小约为 96 kD。用 GST 亲和层析柱纯化获得蛋白，经 Western Blot 检测显示该蛋白可与 GST 单克隆抗体特异性结合。本研究成功构建了 GSTCsPbs2 蛋白融合表达载体，纯化得到 GST-CsPbs2 融合蛋白，为后续利用 Pull-down 技术钓取 CsPbs2 的互作蛋白提供基础。

橡胶树；橡胶树炭疽菌；Pbs2 基因；蛋白纯化；原核表达