孙叶^1,2 , 赵国琦¹ , 袁媛² , 张甜² , 刘红² , 曹宏² , 包建忠² , 陈秀兰^2*

1 扬州大学动物科学与技术学院, 扬州, 225009; 2 江苏里下河地区农业科学研究所, 扬州, 225007
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 19 篇   
收稿日期: 2018年10月26日    接受日期: 2018年11月02日    发表日期: 2020年05月18日

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为了探讨中、日春兰优良种质资源的生物遗传多样性，本研究通过 L₉(3⁴)正交试验，确立 ISSR-PCR 最佳扩增反应体系，筛选 ISSR 引物对 4 个类群 96 份中、日春兰种质材料进行标记扩增。结果表明：本试验筛选出的 ISSR-PCR 最佳扩增反应体系中主要影响因子的浓度为：Mg²⁺ 浓度 2 mmol/L，引物浓度 0.4 μmol/L，Taq 聚合酶用量 1.5 U/20 μL，dNTPs 浓度 0.2 μmol/L；筛选出的 13 条引物在 93 份材料中扩增出 126 个条带，每条引物平均扩增条带数为 9.69，多态性比例(PPB)为 100%，种群总等位基因数(Na)为 2.000 0，有效等位基因数(Ne)为 1.304 5，Nei's 基因多样性(He)为 0.203 3，Shannon's 信息多样性指数(I)为 0.334 0，种群水平上的遗传多样性较高；在类群水平上 PPB 平均值为 82.94%，Na 平均值为 1.829 4，Ne 平均值为 1.301 1，He 平均值为 0.193 8，I 平均值为 0.311 9；类群间的遗传分化系数(Gst)为 0.052 1，基因流水平(Nm)为 9.089 6，类群间的基因交流程度很高，类群间的变异低于类群内的变异；各类群的遗传多样性水平由高到低依次为I类群(中国春兰正格花品种)>III类群(中国春兰杂交种)>II类群(中国春兰蝶花品种)>IV类群(日本春兰品种)，4 个春兰类群两两之间的遗传相似性系数(GS)范围为 0.966 1~0.995 1，总体上遗传距离较小。UPGMA 聚类分析结果显示，ISSR 分子标记能很好的鉴定表型性状相似的春兰原生种和杂交种，在遗传相似系数为 0.82 时，II类(中国春兰蝶花品种)品种和IV类(日本春兰品种)品种能分组聚类，I类(中国春兰正格花品种)品种和III类(中国春兰杂交种)种质混合在一起。春兰是中国的传统特色花卉，春兰优良品种的产业化开发潜力大，中、日春兰种质资源的遗传多样性研究对春兰种质的保护、利用和创新有重要的意义。
 

春兰(Cymbidium goeringii)；遗传多样性； ISSR；聚类分析