房良¹ , 蒲金基² , 张贺² , 李鸿鹏¹ , 吴秋玉¹ , 钟昌开¹ , 刘晓妹¹

1 海南大学热带农林学院, 海南大学热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室, 海口, 570228; 2 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所, 农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室, 海口, 571101
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《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17 卷, 第 26 篇   
收稿日期: 2018年07月25日    接受日期: 2018年08月21日    发表日期: 2019年02月20日

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杧果露水斑病和细菌性黑斑病在国内杧果产区普遍发生，严重威胁杧果安全生产，俗称杧果“两病”。建立准确高效的检测方法，提早检出杧果两病并及时采取防治措施，可有效减轻为害。本实验通过筛选反应体系和电泳条件，建立了可同时检测杧果中的露水斑病菌和细菌性黑斑病菌的双重 PCR 检测体系。结果表明：25 滋L 反应体系，2伊Taq PCR MasterMix 12.5 滋L，引物 ML-SF9/SR5 (10 滋mol/L)各 1.5 滋L、XcmHF/HR (10 滋mol/L)各 1 滋L，模板各 1 滋L，加 ddH2O补足至 25 滋L。反应条件为 94℃预变性 4 min；94℃变性 45 s，65℃退火 45 s，72℃延伸 1 min，35 个循环；72℃延伸 5 min。电泳检测条件为 1.5%琼脂糖凝胶浓度、120 V 电压电泳 25 min。该体系检测下限为杧果露水斑病原菌 gDNA 0.224 ng/滋L、细菌性黑斑菌液 2.6伊104 cfu/mL。该技术可应用于田间杧果“两病”的早期检测与鉴定工作中。

杧果露水斑病菌；杧果细菌性黑斑病菌；双重 PCR 检测体系