徐显异 , 陆婷 , 田嘉^* , 陈小和 , 陈艾

新疆农业大学林学与园艺学院, 乌鲁木齐, 830052
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17 卷, 第 25 篇   
收稿日期: 2018年07月20日    接受日期: 2018年08月10日    发表日期: 2019年08月16日

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本研究旨在建立和优化橡胶草及其近缘种 ISSR (Inter-simple sequence repeat)反应体系和扩增程序。以橡胶草及其近缘种叶片为供试材料，采用单因素试验方法，正交试验方法 L16(44) 和极差分析方法，对橡胶草 ISSR-PCR 反应中 4 个主要影响因素(dNTP 浓度, DNA 浓度, 引物浓度和 Taq DNA 聚合酶浓度)进行优化，并在最优反应体系的基础上进行引物和退火温度的筛选。结果表明：dNTP 和 DNA 对 PCR 扩增结果有较为显著的影响，引物和 Taq 酶的浓度变化对扩增结果无显著影响。最后确定橡胶草及其近缘种 ISSR-PCR 反应体系(20.0 滋L)为：双蒸水 14.2 滋L，10伊Buffer (含 Mg2+) 2.0 滋L，DNA 模板 50.0 ng，10 mmol/L 引物 1.2 滋L，2.5 mmol/L dNTP 1.6 滋L，5 U Taq DNA 聚合酶 0.1 滋L。PCR 扩增程序为：94℃ 5 min，94℃ 45 s，退火 1 min，72℃ 70 s，45 个循环，72℃ 10 min，4℃保存。本研究为橡胶草及其近缘种的遗传多样性和交配系统等后续研究提供理论参考。

橡胶草(Taraxacum kok-saghyz)；ISSR；单因素试验；正交试验