潘琦^* , 岳建苏^* , 王翠伦 , 于士将 , 周浩楠 , 杨娟生 , 侯栋元 , 成禄艳 , 冉春

中国农业科学院, 西南大学柑桔研究所, 重庆, 400712
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17 卷, 第 17 篇   
收稿日期: 2018年06月07日    接受日期: 2018年07月09日    发表日期: 2019年02月20日

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桔小实蝇是重要的柑橘害虫，目前已对多种杀虫剂产生不同程度的抗性，化学防治方法往往效果不理想，近年来植物转基因抗虫育种技术表现出巨大的潜力，这为更好地防治桔小实蝇提供了新思路。本研究为获得桔小实蝇抗性转基因柑橘，对桔小实蝇细胞色素 P450 基因(cytochrome P450 monoxygenases, P450)和电压门控钠离子通道基因(sodium channel, SC)进行核苷酸序列比对，分别克隆得到片段大小为 590 bp 和550 bp 的 P450 基因和 SC 基因的正反目标片段，利用植物表达载体 pFGC5941，将基因正反向片段与 Intron 两端连接，成功构建 RNA 干扰(RNAi)载体“pFGC-P1F1R1/P2F2”和“pFGC-C1R1/C2R2”。本研究利用Xho玉-Nco玉、Xba玉-BamH玉酶切位点对质粒和载体进行双酶切分析实验，克隆测序得到大小为 590 bp 和550 bp 的两个酶切片段，经核苷酸序列比对分析，验证其与插入片段一致，说明 RNAi 载体构建成功。通过农杆菌遗传转化体系，将外源重组载体整合到柑橘基因组中，经除草剂筛选、PCR 检测分别得到 12 株转 P450基因阳性苗和 9 株转钠离子通道基因阳性苗，这为后期柑橘抗桔小实蝇效果评价提供了实验材料。

桔小实蝇；P450 基因；钠离子通道基因；RNAi 载体；遗传转化