卢超¹ , 何银生¹ , 艾伦强¹ , 刘海华¹ , 周武先¹ , 段媛媛¹ , 程天周² , 张美德^1*

1 湖北省农业科学院中药材研究所, 湖北省农业科技创新中心中药材分中心, 恩施, 445000; 2 恩施程丰农业综合开发有限公司, 恩施, 445000
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 28 篇   
收稿日期: 2018年06月01日    接受日期: 2018年06月21日    发表日期: 2019年01月17日

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为了得到适宜的咸丰白术 ISSR 反应体系，采用两轮 U12 (62伊4)均匀设计的方法，对 ISSR 反应中各组分设置不同的梯度，分析反应体系各组分用量对扩增结果的影响。结果表明，在 18 滋L 的 ISSR 反应体系中，引物 0.29 滋mol/L，2伊Taq Master Mix 9.6 滋L，模板 DNA 47 ng 时，扩增条带较清晰，多态性好。根据得到的优化体系，进一步开展白术的引物筛选，并从中得到了 9 条扩增条带相对清晰稳定、多态性较好的引物。对筛选的多态性引物开展了温度梯度 PCR 实验，发现温度对 ISSR-PCR 扩增结果影响显著。本实验通过采用均匀设计的方法，降低了常规体系优化实验所需次数，节省了时间和试剂的用量，为快速建立 ISSR 反应体系和后续咸丰白术遗传多样性分析提供了便利与帮助。
 

ISSR；道地药材；白术；体系优化