王帅 , 程林 , 杨利民^* , 韩梅

吉林农业大学中药材学院, 长春, 130118
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17 卷, 第 29 篇   
收稿日期: 2018年05月04日    接受日期: 2018年06月12日    发表日期: 2019年05月22日

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利用 SYBR Green域染料法，建立黄芩实时荧光定量 PCR 的反应体系。根据 18S rRNA 基因序列保守性，在 18S rRNA 基因保守区设计一对特异性引物，以常规 PCR 产物为标准品，浓度梯度稀释后制定标准曲线，对溶解曲线进行分析，对 PCR 退火温度，引物浓度，模板浓度等反应条件进行优化。结果表明：在 20 滋L反应体系中，加入 10 滋L SYBR Premix Ex TaqTM 时，引物和 cDNA 最佳加入量分别为 0.8 滋L 和 1.0 滋L；最佳反应程序：进行 40 次循环，95℃预变性 30 s，95℃变性 5 s，55℃退火 30 s，72℃延伸 30 s。标准曲线 Ct 的检测范围在 14~29，扩增效率为 97.8%；溶解曲线显示为单峰，其 Tm 为(85依1.0)℃。本研究建立的黄芩 18S rRNA基因实时荧光定量 PCR 法，具有检测范围广，扩增效率高，特异性高等优点，对从分子水平阐明黄芩药效成分合成机制，筛选高产优质的黄芩种质资源具有重要的意义。
 

黄芩；内参基因；实时荧光定量 PCR；SYBR Green Ⅱ