研究报告
蚕豆 ISSR 反应体系的建立与优化 
侯万伟* 
青海大学农林科学院, 省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室, 西宁, 810016
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17 卷, 第 25 篇
收稿日期: 2018年05月11日 接受日期: 2018年10月17日 发表日期: 2019年08月28日
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17 卷, 第 25 篇
收稿日期: 2018年05月11日 接受日期: 2018年10月17日 发表日期: 2019年08月28日
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摘要
本研究通过正交设计，对蚕豆基因组 ISSR 反应的 5 个因素(镁离子, 模板 DNA 浓度, 引物浓度,dNTP 浓度, Taq 酶浓度)进行优化，建立蚕豆 ISSR-PCR 扩增体系。通过正交设计试验确定的 PCR 扩增体系为(20μL)：10×缓冲液 2.0μL，引物浓度 3 mmol/L、dNTPs 浓度 0.4 mmol/L、Taq DNA 聚合酶浓度 1.0 U、基因组 DNA 200 ng、Mg2+浓度 1.5 mmol/L。反应程序为：95℃变性 5 min；95℃变性 45 s；52℃退火 30 s，72℃延伸 90 s，循环 35 次；72℃延伸 8 min，4℃保存。通过试验建立的反应体系扩增稳定，扩增的条带清晰，该体系为后续蚕豆种质资源鉴定、性状的分子标记等研究提供了科学依据。
关键词
蚕豆(Vicia faba L.)；ISSR；反应体系
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