詹瑶^1,2 , 曹高燚^1,2 , 曹雪松^1,2 , 武俊杰^1,2 , 丁博^1,2 , 李明^1,2 , 谢晓东^1,2*

1 天津农学院农学与资源环境学院, 天津, 300384; 2 天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心, 天津, 300384
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 16 篇   
收稿日期: 2018年03月22日    接受日期: 2018年04月18日    发表日期: 2019年01月22日

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鉴定合成的或通过高通量随机组合方法获得的潜在功能片段的生物学功能需要一套高效便捷的酵母表达专用载体。酵母表达载体 pYES2 多克隆位点处不含起始密码子，通过设计含有 ATG 和 EcoR玉酶切位点的特异性引物扩增一段 Intron，利用 In-Fusion 重组技术(Clontech)将该片段构建至酵母表达载体pYES2，得到一个含有 ATG 的重组酵母表达载体 pYES2-ATG。为了检测该载体的功能，扩增不含起始密码子的 DNA 序列 nlea，该序 列由本实验室设 计合成，具有潜在 的耐 盐功 能。构 建重 组 表达 载体pYES2-ATG-nlea 在酵母中进行功能鉴定。研究结果表明，半乳糖诱导后，含 pYES2-ATG-nlea 的重组酵母菌株耐盐能力明显高于含 pYES2-ATG 空质粒的菌株，表明在该载体系统上的添加了起始密码子的 nlea 成功表达，具有一定的耐盐性，同时也证明改造的载体系统可用于没有起始密码子的编码区序列的功能筛选和鉴定。pYES2-ATG 酵母载体系统不影响原始载体基本功能元件的表达，同时能使不含起始密码子编码区序列在酵母中正常表达，在大规模进行多个基因的功能鉴定中具有重要的应用价值。

起始密码子；酿酒酵母；pYES2；In-Fusion 重组技术