吴林鲜 , 兰晓天 , 朱永平 , 胡淞 , 田英男 , 冯磊 , 刘修远 , 万希文 , 何静 , 和凤美^*

云南农业大学, 昆明, 650201
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 20 篇   
收稿日期: 2018年01月24日    接受日期: 2018年02月08日    发表日期: 2019年01月23日

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MADS 基因家族对植物成花具有重要作用，在兰花中，目前还没有利用 CRISPR/Cas9 进行基因编辑的相关报道。墨兰(Cymbidium sinense) B 类 PISTILLA TA (PI)基因可能与墨兰舌瓣的形成有关，为了进一步验证其 PI 基因的功能，本研究利用在线软件 CRISPR-P 设计 3 个靶点，并采用 Overlapping-PCR 技术和Golden Gate cloning 策略构建了墨兰 PI 基因 CRISPR/Cas9 的多重 sgRNA 载体系统，经 PCR、酶切和测序验证，植物编辑载体已构建成功。为在墨兰中实现该基因的定向突变提供了理论依据，同时也为在兰花基因组中应用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术进行基因的定点突变修饰提供参考。

CRISPR/Cas9；墨兰；MADS-box；PI；基因功能